Информация на сайте предназначена только для медицинских и фармацевтических специалистов. Не предназначена для самостоятельной диагностики или лечения

Отчет о доклинических исследованиях лекарственного препарата ОКОМИСТИН®, глазные капли

(ООО «ИНФАМЕД», Россия)

I. ВВЕДЕНИЕ

Основным действующим веществом препарата ОКОМИСТИН® является антисептик широкого спектра действия - мирамистин®. Мирамистин обладает высокой противомикробной активностью, и широко применяется в различных областях медицины в форме раствора для местного применения.

Мирамистин - катионное поверхностно-активное вещество с антисептическим действием. В основе антимикробной активности мирамистина лежит прямое взаимодействие его молекулы с липидами мембран микроорганизмов: часть молекулы мирамистина, погружаясь в липофильный слой мембраны, разрыхляет ее с повышением проницаемости мембраны для крупномолекулярных веществ, изменяет энзиматическую активность микробной клетки, ингибируя ферментные системы, что приводит к угнетению жизнедеятельности микроорганизмов и их цитолизу.

В отличие от других антисептиков мирамистин обладает высокой избирательностью действия в отношении микроорганизмов и практически не действует на клеточные мембраны человека. Данный эффект связан с иной структурой клеточных мембран человека (значительно большей длиной липидных радикалов, резко ограничивающих возможность гидрофобного взаимодействия мирамистина с клетками).

Мирамистин обладает выраженным антимикробным действием в отношении грамположительных и грамотрицательных, аэробных и анаэробных, спорообразующих и аспорогенных бактерий в виде монокультур и микробных ассоциаций, включая госпитальные штаммы с полирезистентностью к антибиотикам. Действует губительно на возбудителей заболеваний, передающихся половым путем - гонококки, бледные трепонемы, трихомонады, хламидии, а также на вирусы герпеса и др. Оказывает противогрибковое действие на аскомицеты рода Aspergillus и рода Penicillium, дрожжевые (Rhodotorula rubra, Torulopsis gabrata и т.д.) и дрожжеподобные (Candida albicans, Candida krusei и т.д.) грибы, дерматофиты (Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton verrucosum, T. schoenleini, T. violaceum, Epidermophyton Kaufman-Wolf, E. floccosum, Microsporum gypseum, Microsporum canis и т.д.), другие патогенные грибы (например Pityrosporum orbiculare (Malassezia furfur)) в виде монокультур и микробных ассоциаций, включая грибковую микрофлору с резистентностью к химиотерапевтическим препаратам.

Под действием мирамистина снижается устойчивость микроорганизмов к антибиотикам. Мирамистин обладает противовоспалительным и иммуноадъювантным действием, усиливает местные защитные реакции, регенераторные процессы,

INFAMED

Общество с ограниченной ответственностью

ИНФАМЕД

активизирует механизмы неспецифической защиты вследствие модуляции клеточного и местного гуморального иммунного ответа.

II. СВЕДЕНИЯ О ТОКСИЧНОСТИ ПРЕПАРАТА.

Доклинические исследования были направлены на углубленное изучение офтальмобезвредности препарата ОКОМИСТИН®, глазные капли (ЗАО «ИНФАМЕД», Россия).

Объектом исследования служили образцы препарата, следующего состава:

Активное вещество: Бензилдиметил [3-(миристоиламино) пропил] аммоний хлорида, моногидрата (Мирамистин, в пересчете на безводное вещество)

0,01 г

Вспомогательные вещества: натрия хлорида

0,9 г

воды очищенной

до 100 мл

Исследование офтальмобезвредности глазных капель Окомистин® (ЗАО «ИНФАМЕД», Россия) проводили с целью установить наличие, характер и выраженность их возможных токсических эффектов на наружные и внутренние структуры глаза у неполовозрелых кроликов.

Исследование проводилось при различных режимах инстилляций у неполовозрелых кроликов (возраст - 40 дней).

Критериями оценки офтальмобезвредности служили:

• возможное местно-раздражающее действие препарата на структуры переднего отдела глаза (конъюнктива, роговица, радужка) по данным наружного осмотра и передней биомикроскопии;

• целостность эпителия роговицы по данным флуоресцеиновой пробы;

• состояние глазного, дна по данным офтальмоскопии;

• данные гистологического исследования тканей глазного яблока,

Перечень исследований определен согласно методическим рекомендациям по «Экспериментальному изучению токсического действия потенциальных лекарственных средств» и «Экспериментальному изучению безвредности и фармакологической активности глазных лекарственных средств», и включал:

• острую офтальмотоксичность при многократных частых инстилляциях (каждые 15 минут в течение 6 часов) - изучение местно-раздражающего действия препарата на структуры переднего отдела глаза (конъюнктива, роговица, радужка) при наружном осмотре и биомикроскопически;

• подострую офтальмотоксичность при 2-х кратных инстилляциях в течение 7 дней - биомикроскопическое изучение местно-раздражающего действия препарата, его влияния на целостность эпителия роговицы по флуоресцеиновой пробе, состояние глазного дна методом офтальмоскопии. По завершению 7-дневных инстилляций производили патоморфологическое исследование гистоструктуры глаз.

 

Острая офтальмотоксичность.

Изучена в режиме многократных частых инсталляций - по 2 капли (в среднем 0,1 мл) в конъюнктивальный мешок правого глаза каждые 15 мин в течение 6 часов (суммарная доза - 2,4 мл/животное). Левый глаз служил в качестве интактного контроля.

Такой относительно жёсткий режим определяется максимально целесообразной частотой инстилляций препарата. При этом обеспечивается максимально возможная его

резорбция, как в ткани глаза, так и в системный кровоток, что позволяет выявить как местные, так и непосредственные общерезорбтивные побочные эффекты препарата.

Показателями острой офтальмотоксичности служили данные о влиянии препарата на структуры переднего отдела глаза - роговицу, радужную оболочку и конъюнктиву (местно-раздражающее действие), которые оценивали по шкале Дрейза в баллах.

Все изучаемые показатели регистрировали при наружном осмотре и биомикроскопически на щелевой лампе ЩЛ-2Б перед началом инсталляций, по окончанию инстилляций и спустя 24, 48 и 72 часа после начала инстилляций.

Каждый кролик учитывался отдельно по сумме баллов в блоке «роговица + радужка + конъюнктива». Тест Дрейза расценивают как позитивный (препарат оказывает местно-раздражающее действие), если сумма его баллов у данного кролика выше 20.

Подострая офталъмотоксичность

Изучена в режиме терапевтической для человека кратности инстилляций - по 2 капли (в среднем 0,1 мл), в конъюнктивальный мешок правого глаза 3 раза в день, что соответствует средней суточной дозе 0,3 мл/животное. Левый глаз служил в качестве интактного контроля. Длительность курса повторных инстилляций составила 7 дней, что определяется продолжительностью медицинского применения препарата (по 1-2 капли троекратно с интервалом 2-3 часа).

Показателями подострой офтальмотоксичности служили: данные о местно-раздражающем действии препарата, его влиянии на целостность эпителия роговицы и состояние глазного дна.

Местно-раздражающее действие

Оценивали по шкале Дрейза. Целостность эпителия роговицы оценивали по флюоресцеиновой пробе, после инстилляций 1 капли 1% раствора флюоресцеина натрия в конъюнктивальный мешок глаза.

Офтальмоскопическое исследование глазного дна проводили при помощи офтальмоскопа ручного универсального ОР-ЗА.

Показатели местно-раздражающего действия регистрировали перед началом инстилляций, через 3, 5 и 7 дней. Целостность роговицы и офтальмоскопическое исследование проводили перед началом инстилляций, а также после их завершения (7-е сутки).

Результаты

Острая офтальмотоксичность

До начала исследования состояние структур переднего отдела глаза у всех животных соответствовало физиологической норме:

• роговица - гладкая, блестящая, зеркальная, без помутнений;

• радужка — равномерно пигментирована, зрачок круглый, реагирует на свет (при увеличении освещенности зрачок сужается, при уменьшении -расширяется);

• конъюнктива - видны единичные сосуды, гиперемии нет; конъюнктива век розовая, прозрачная, неотечная; отделяемое отсутствует.

По завершению частых 6-ти часовых инстилляций Окомистина показатели состояния роговицы и радужки у всех кроликов сохранялись на исходном уровне и по шкале Дрейза были оценены в 0 баллов.

Конъюнктива. Глазные капли при их частых инсталляциях вызывают легкое местное раздражение конъюнктивы век, которое выявляется через 4 часа инстилляций у 3-х из 6-ти кроликов каждой группы в виде легкой гиперемии конъюнктивы (1 балл). К 6-му часу у

всех кроликов наблюдалась незначительная гиперемия и отечность конъюнктивы без отделяемого, явления местного раздражения оценивались по Дрейзу в 1-4 балла.

Через 24 часа выраженность явлений местного раздражения конъюнктивы практически угасла: явления легкого раздражения наблюдались только у 2-х кроликов и составляли по 1 баллу.

Через 48 и 72 часа после начала инстилляций изучаемого препарата состояние всех структур переднего отдела глаза соответствовало физиологической норме.

Результаты оценки возможного местно-раздражающего действия Окомистина показывают, что ни у одного из кроликов сумма баллов в блоке «роговица + радужка + конъюнктива» не превышает 4-х баллов.

Исходя из принятой трактовки результатов теста Дрейза, можно заключить, что препарат Окомистин® не оказывает местно-раздражающего действия на ткани переднего отдела глаза неполовозрелых кроликов при многократных частых инсталляциях в течение 6 часов.

 

Подострая офтальмотоксичность.

До начала исследования состояние структур переднего отдела глаза у всех кроликов соответствовало физиологической норме: роговица — гладкая, блестящая, зеркальная, без помутнений; радужка — равномерно пигментирована, зрачок круглый, реагирует на свет (при увеличении освещенности зрачок сужается, при уменьшении -расширяется); конъюнктива - видны единичные сосуды, гиперемии нет; конъюнктива век розовая, прозрачная, неотечная; отделяемое отсутствует.

Флуоресцеиновая проба. По данным флуоресцеиновой пробы не выявлено каких-либо повреждений целостности эпителия роговицы: после закапывания 1% раствора флуоресцеина определяется равномерное зеленоватое свечение всей поверхности роговицы (флуоресцеиновая проба отрицательная).

Глазное дно. Диск зрительного нерва бледно-розового цвета с четкими границами, ход сосудов не изменен, калибр артерий и вен в соответствующих стволах имеет соотношение 2:3, очагов и кровоизлияний не выявлено.

Через 3 дня после начала инстилляций у всех животных, получавших изучаемые капли Окомистин, не наблюдалось каких-либо явлений местного раздражения глаз - реакция радужки, роговицы и конъюнктивы по шкале Дрейза всегда оценивалась в 0 баллов.

Через 5 дней эксперимента у 2-х кроликов отмечалась начальная реакция переднего отдела глаза на инстилляции капель в виде незначительной гиперемии и отека конъюнктивы внутренней поверхности век, оцениваемая по шкале Дрейза в 1 балл.

По завершению инсталляций - через 7 дней - явления местного раздражения в виде незначительной гиперемии и отека внутренней поверхности век (1-4 балла), наблюдались у 3-х кроликов.

Из результатов видно, что ни у одного из кроликов на протяжении 7-дневных инсталляций сумма баллов в блоке «роговица + радужка + конъюнктива» не превышает 4-х баллов. Таким образом, глазные капли Окомистин не оказывают раздражающего действия на структуры переднего отдела глаза неполовозрелых кроликов.

По данным флуоресцеиновой пробы через 7 дней инсталляций не выявлено каких-либо повреждений целостности эпителия роговицы под влиянием глазных капель Окомистин. .

При офтальмоскопии глазного дна по завершению инсталляций изучаемого препарата у кроликов не обнаружено каких-либо изменений по сравнению с исходной картиной.

Доклинические исследования препарата Окомистин®, глазные капли (ЗАО «ИНФАМЕД», Россия) показали их безвредность для организма экспериментальных животных. Окомистин® не оказывает раздражающего и аллергизирующего действия на кожу и слизистые. Установлено, что глазные капли Окомистин при многократных частых инстилляциях (каждые 15 минут в течение 6 часов) и при ежедневных 2-х кратных

инстилляциях в течение 7 дней не оказывают раздражающего действия, не влияют на целостность эпителия роговицы, состояние глазного дна, не изменяют гистоструктуру тканей глаза у неполовозрелых кроликов.

 

III. ФАРМАКОЛОГИЯ

Изучение специфического действия препарата Окомистин®

Результаты исследований, подтверждающих фармакологическую активность препарата Окомистин®.

Действие препарата Окомистин® при гнойно-воспалительных поражениях роговицы глаз.

Опыты были поставлены на 14 кроликах породы шиншилла весом 2 - 2,5 кг. Гнойно-воспалительные поражения роговицы вызывали путем введения внутрь роговицы глаза 0,03 мл взвеси суточной культуры Staphylococcus aureus (штамм 209 Р). На 2 - 4 сутки у всех кроликов на роговице глаза образовались язвы размером 3 х 6 мм с гнойным отделяемым на дне, а также наблюдались явления воспалительных реакций: конъюнктивит, блефароспазм и др.

Взятые в опыт кролики были разделены на три группы. Животных первой и второй групп (по 5 кроликов в каждой) лечили препаратом Окомистин® и декаметоксиновыми глазными каплями (ДГК) соответственно, а животным третьей, контрольной группы (4 кролика), в пораженные глаза закапывали изотонический раствор натрия хлорида. Препараты закапывали ежедневно трехкратно на протяжении всего эксперимента.

За всеми животными ежедневно проводили наблюдения, контролируя динамику изменений в роговице глаз опытных и контрольных животных по ранее описанной методике. Кроме этого, проводили посевы смывов с роговицы глаз кроликов на мясопептонный бульон для определения наличия S. aureus (штамм 209 Р).

Полученные данные свидетельствуют, что гнойные выделения и обнаружение S. aureus полностью прекратились на 4 и 6 сутки у всех животных, леченных препаратом Окомистин® и декаметоксиновыми глазными каплями соответственно. В то же время среди не леченных животных гнойные выделения наблюдались на протяжении всего периода эксперимента.

Рассасывание гнойного инфильтрата быстрее началось и завершилось у всех животных, леченных препаратом Окомистин®, на 3 и 5 сутки от начала лечения соответственно. У животных, леченных ДГК, время начала и завершения рассасывания гнойного инфильтрата у всех животных составило 4 и 10 сутки от начала лечения соответственно.

Эпителизация роговицы глаз наступила у всех животных к 10 и 16 дню от начала лечения препаратом Окомистин® и ДГК соответственно.

Таким образом, из приведенных выше данных можно заключить, что терапевтический эффект препарата Окомистин® в сравнении с ДГК выше при лечении гнойно-воспалительных поражений роговицы глаз.

Действие препарата Окомистин® при термическом ожоге роговицы.

У 15 разнополых крыс Вистар термический ожог обоих глаз вызывали мгновенным (доли секунды) прикосновением к роговице конца раскаленной медной проволоки, образующей в сечении круг диаметром 1 мм. Проволока жестко крепилась на

жале электропаяльника, который использовался в качестве нагревательного элемента (60 Вт), обеспечивающего постоянную, достаточную для воспроизведения ожога, температуру. Ожоговую травму вызывали у животных, наркотизированных диэтиловым эфиром, при неподвижном глазном яблоке, что позволило стандартизовать манипуляцию - прикасаться к центру роговице строго напротив зрачка под прямым углом.

Сразу после нанесения ожога крысы были разделены на три группы (по 5 животных в каждой). Животным 1-й группы в оба глаза немедленно закапывали по 1 капле препарата Окомистин®; в дальнейшем орошение глаз проводили два раза в сутки (утром и вечером) в течение 24 дней. В качестве препарата сравнения были использованы декаметоксиновые глазные капли (ДГК), содержащие 0,02% раствор антисептика декаметоксина на изотоническом растворе натрия хлорида, разрешенные для применения в медицинской практике и широко используемые в офтальмологии в качестве эффективного антисептического средства. Крысам 2-й группы по аналогичной методике закапывали 0,02% раствор декаметоксиновых глазных капель (ДГК). Животным 3-й группы (контрольной) по той же схеме закапывали стерильный изотонический раствор натрия хлорида.

Учет и описание изменений в роговице глаз производили спустя 4, 7, 9, 11, 15, 18, 21 и 24 дня от начала эксперимента. Методика исследования заключалась в тщательном осмотре глаз наркотизированных животных при помощи бинокулярной лупы и офтальмоскопа, с применением прокрашивания ожоговой поверхности 1% водным раствором бенгаля розового.

В течение опыта во 2-й опытной (получавших ДГК) и контрольной группах пали по две крысы. Смерть животных была связана с инокуррентными заболеваниями, которые не были диагностированы перед началом опыта.

Во всех случаях ожог сопровождался немедленным развитием эрозии роговицы дефекта эпителиальной выстилки, который по форме и площади соответствовал сечению термоэлемента. Дальнейшее изменение эрозивной поверхности протекали в двух направлениях:

1 - уменьшение площади эрозии вплоть до её полного исчезновения;

2 - трансформация эрозии в язву с последующим её прободением.

У крыс 1-й и 2-й групп, глаза которых обрабатывались препаратом Окомистин® и ДГК, наблюдали лишь первый вариант течения. Причем, уже спустя 4 дня от начала опыта, у животных, получавших Окомистин®, эрозии определялись только на шести глазах из десяти (4 в форме пятна и 2 точечных). В этот же период у крыс, которым закапывали ДГК, зарегистрированы 7 эрозий ( 6 в форме пятна и 1 точечная). К 7 дню у животных обеих групп сохранилось по три точечных дефекта, которые в последующем (к 9 и 11 дню) также исчезали ( перестали выявляться при обработке глаз раствором бенгаля розового).

У крыс 3-й контрольной, группы через 4 дня после нанесения ожоговой травмы отмечены шесть эрозий в форме пятна и одна язва роговицы. Далее (к 9 дню) количество эрозий сократилось до нуля как в следствии спонтанного заживления, так и в связи с гибелью животного. В то же время, процесс изъязвления роговицы, напротив, прогрессировал: деструктивные изменения затрагивали все более глубокие слои, увеличивались размеры дефекта. К 9 дню язва занимала около 25% всей площади роговицы; на 15 день произошла перфорация язвы в переднюю камеру, что привело к истечению внутренней среды глаза с последующей субатрофией глазного яблока. В этом случае дефект роговицы сохранялся вплоть до образования соединительнотканного рубца (18 день).

Ожог роговицы у всех крыс приводил к быстрому развитию острой асептической воспалительной реакции поверхностных тканей глаза, проявлявшейся в виде перифокального отека, инъекции (гиперемии) сосудов и выделении серозной или серозно-геморрагической жидкости из глаз, а в некоторых случаях также из носа.

Указанная реакция в большинстве случаев имела преходящий характер и не обнаруживалась уже к 4 дню от начала эксперимента. Это относится, главным образом, к крысам 1 - й группы, у которых офтальмологические проявления воспаления не определялись в течение всего периода наблюдения (на протяжении 4 - 24 дней).

Вместе с тем, у некоторых животных 2-й группы (ДГК) на 9 - 15 день отмечены серозно-геморрагические выделения. Развитие последнего сопровождалось в определенном периоде (11 день) появлением гнойного отделяемого. Гнойная инфильтрация роговицы сопутствовала также развитию язвенного кератита (у одной крысы контрольной группы). В той же группе зарегистрированы выделения сукровицы (из двух глаз спустя 4 дня от начала опыта; из одного глаза через 7, 21 и 24 дня).

Одним из основных симптомов, наблюдавшихся у крыс всех трех групп, являлось помутнение роговицы, которое развивалось практически сразу вслед за нанесением ожоговой травмы и имело форму круга (круглого пятна) диаметром около 1 мм, с нечеткими краями.

У животных, получавших Окомистин®, первоначальный характер помутнения постепенно (к 11 дню) изменился на более благоприятный (пятно с четкими краями), который сохранялся на всех глазах еще неделю (до 18 дня включительно). К концу эксперимента (24 день) помутнения такого рода определялись на пяти глазах: на роговице четырех глаз имело место лишь мелкоточечное помутнение, и в случае прозрачность роговицы восстановилась полностью.

У крыс, которым закапывали ДГК, первоначальный характер помутнения (с нечеткими краями) в сравнении с животными, получавшими Окомистин®, прослеживался дольше включительно до 18 дня наблюдений. Затем, в течение последней недели опыта, у трех крыс, оставшихся в живых, произошли следующие изменения: на одном глазу сформировалось бельмо; пятна помутнения роговицы приобрели четкие границы, и только одно пятно уменьшилось до точки.

В контрольной группе помутнение с размытыми границами перестало наблюдаться к 15 дню, сменившись в большинстве случаев (7 глаз) на помутнение с четкими краями и в одном глазу трансформировавшись в бельмо. В конце опыта зарегистрированы те же результаты, что и у животных, получавших ДГК : одно бельмо, четыре четко очерченных пятна помутнения и одно помутнение в виде точки.

Реэпителизация роговицы протекала наиболее быстро у крыс, которым закапывали Окомистин®. Процесс эпителизации завершился у всех животных к 9 дню наблюдений. При использовании ДГК восстановление эпителиальной выстилки продолжалось до 11 дня, а у контрольных крыс - до 21 дня наблюдений.

У некоторых животных восстановление целостности роговицы сопровождалось прорастанием кровеносных сосудов с периферии в помутнённые участки, что, как известно, указывает на более тяжелое течение ожоговой травмы, чем в случаях, когда восстановление прозрачности роговицы происходит без её васкуляризации. Эти данные свидетельствуют о наиболее благоприятном течении ожогового процесса у крыс, глаза которых обрабатывались препаратом Окомистин®, и наиболее тяжелом - у контрольных животных.

 

Результаты

Результаты исследования позволяют сделать вывод о перспективности препарата Окомистин® в качестве средства лечения термических ожогов роговицы и предупреждения их осложнений (в т.ч. язвенного и гнойного кератита, стойкого помутнения роговицы). Окомистин®, как и ДГК, препятствовали трансформации эрозивного процесса в язвенный, но препарат Окомистин®, по сравнению с ДГК, обладали более выраженной противовоспалительной активностью и оказывали более выраженное рассасывающее действие на зоны помутнения, профилактируя образование бельма.

Действие препарата Окомистин® при химическом ожоге роговицы.

 

Опыты на крысах

У 30 наркотизированных диэтиловым эфиром разнополых крыс Вистар химический ожог обоих глаз вызывали прикосновением к роговице конца палочки из стекловолоконных нитей диаметром 2 мм, смоченной в 10 % водном растворе аммиака.

Животным всех групп оба глаза немедленно промывали обильно водой и затем закапывали по 1 капле препарата Окомистин®, 0,02% раствора декаметоксиновых глазных капель (ДГК) и изотонического раствора натрия хлорида, соответственно. В дальнейшем орошение глаз проводили по описанной выше методике в течение 15 дней. Учет изменений производили спустя 1, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 9, 10, 13, 14, 15 дни от начала эксперимента.

Альтернативные изменения

Воздействие раствором аммиака во всех случаях приводило к повреждению эпителиальной выстилки роговицы, но лишь в части случаев это сопровождалось появлением темной точки, свидетельствующей об образовании изъязвления (зоны колликвационного некроза).

Процесс заживления язв (рубцевание, эпителизация) протекал примерно с одинаковой скоростью у животных всех трех групп: последние признаки некротических изменений роговицы наблюдались через 10 - 13 дней после нанесения ожоговой травмы.

Помутнение роговицы

Помутнение роговицы развивалось у всех без исключения животных и претерпевало в течение эксперимента следующие основные стадии развития:

1. Благоприятный вариант: пятно помутнения с прозрачной зоной (частичное рассасывание) или исчезновение пятна помутнения (полное рассасывание);

2. Неблагоприятный вариант: пятно помутнения с прорастанием сосудов (предбельмо) или формирование бельма.

Воспалительная реакция

Динамика воспалительных изменений (наличие отделяемого из глаз, отек век, конъюнктивит, блефароспазм) со всей очевидностью свидетельствовала о преимуществах применения препарата Окомистин® по сравнению с ДГК.

 

Результаты

Наибольший терапевтический эффект достигнут при использовании препарата Окомистин®. Только в группе животных, получавших Окомистин®, зарегистрированы случаи полного рассасывания пятна помутнения, а в 25% случаев к концу опыта в месте пятна помутнения образовывались прозрачные зоны (в других группах - только в 10 - 15 % случаев), что можно рассматривать как прогностически благоприятный признак, указывающий на возможность дальнейшего рассасывания пятна помутнения. Позитивное влияние препарата Окомистин® отмечено также по показателю васкуляризации роговицы. У этих животных к окончанию эксперимента лишь 2 глаза имели пятна помутнения с проросшими сосудами, тогда как у крыс - ДГК и контрольных животных таких глаз было 8 и 7, соответственно. Применение 0,02% раствор декаметоксиновых глазных капель (ДГК) не оказывает положительного влияния на процессы помутнения и восстановления прозрачности роговицы. Судя по совокупности соответствующих показателей, крысы, которым закапывали ДГК, пострадали даже больше, чем животные контрольной группы.

Опыты на кроликах.

Моделирование ожогов роговицы тяжелой степени проводили по «Методике Гусевой О.Г.» при помощи стандартного полукруглого штампа из фильтровальной бумаги диаметром 8 мм. После эпибульбарной анестезии 0,25% раствором дикаина и сублюксации глазного яблока на верхнюю половину роговицы на 10 секунд накладывался штамп, пропитанный 10% р-ром NaOH. Непосредственно после нанесения ожога глазное яблоко орошалось обильно водой, после чего начинали закапывать Окомистин® (20 кроликов). В контрольных группах животным (по 10 кроликов) закапывали 0,02% раствор декаметоксиновых глазных капель (ДГК) и изотонический раствор натрия хлорида.

Динамика повреждений глаза регистрировалась на основании следующих признаков ожогового процесса:

1) площадь и сроки эпителизации роговицы;

2) сроки и интенсивность васкуляризации роговицы (по трехбалльной системе);

3) степень выраженности воспалительной реакции переднего отрезка глазного яблока (по трехбалльной системе) и длительность её течения;

4) выраженность и сроки исчезновения отека роговицы;

5) степень помутнения роговицы (по шкале В.В. Войно-Ясинецкого);

6) наличие осложнений: иридоциклит, инфильтрация и перфорации роговицы, экссудации в передней камере, рецидивы эрозии.

Динамику репаративных процессов пораженных ожогом тканей контролировали путем гистологического исследования глаз животных на 7-е, 14-е, 21-е и 28-е сутки после нанесения ожога. Фиксирование удаленных роговиц производили в 10% растворе формалина. Гистологические препараты готовили по общепринятой методике с окраской гематоксилин-эозином. Проводились также электронно-микроскопические исследования роговицы глаз экспериментальных животных. Контроль за состоянием глаз осуществляли в течение 3-х месяцев.

В контрольной группе животных, которым после нанесения химического ожога и промывания водой, закапывали изотонический раствор натрия хлорида, наблюдалась следующая динамика развития процесса. Непосредственно после воздействия 10% р-ра NaOH возникало помутнение роговицы до 10 баллов. Первичное помутнение роговицы обусловлено деполимеризацией кислых мукополисахаридов. В дальнейшем наблюдалось нарастание интенсивности отека роговицы, реактивная гиперемия конъюнктивы и сосудов радужки, волнообразная эпителизация роговицы. На 6 сутки заболевания, воспалительная реакция переднего отрезка глазного яблока соответствовала интенсивности 3 баллов.

В 100% наблюдался выраженный блефароспазм, гиперемия конъюнктивы с наличием слизисто-гнойного отделяемого, резко выраженный отек век. К 15 суткам после ожога выше указанные воспалительные явления также были достаточно выражены, их интенсивность соответствовала 3 баллам.

К 21 суткам воспалительная реакция уменьшалась в незначительной степени и составляла 2,80,1 балла. Достоверное снижение уровня воспалительной реакции отмечено к 28 суткам после ожога 1,40,2 балла (Р< 0,01). Купирование воспалительных явлений зарегистрировано на 50 - 51 сутки.

Динамика эпителизации пораженной роговицы характеризовалась торпидностью, рецидивирующим течением эрозий. Максимальная средняя площадь первичных эрозий, отмеченная на 8 сутки после нанесения ожога и составила 25,6 мм. Первичная эпителизация зарегистрирована в следующие сроки: начало на 12 сутки после ожога, а завершение на 17-19 сутки. Рецидивы эрозий наблюдались на всех глазах (100% случаев). На 21 сутки заболевания на 15 глазах (19,3%) отмечено появление экссудата в передней камере, а на 5 глазах (7,9%) инфильтрация роговой оболочки.

Неоваскуляризация роговицы выявлена с 12-13 сутки после ожога. Наиболее выраженная степень васкуляризации отмечена к 15 сутки. Сосудистая реакция начинала претерпевать обратное развитие с 30 суток.

Окончание васкуляризации отмечено на 40 сутки ожогового процесса. Частичное просветление периферической части роговицы начиналось с 13-15 дня. К концу четвертого месяца наблюдений интенсивные васкуляризованные бельма роговицы плотностью 8-9 баллов отмечались на 38 глазах (90%) и плотностью 5-7 баллов на 2 глазах (10%).

Динамика митотического индекса выявила следующие показатели: снижение величин митотического индекса достигло максимума на 22 сутки после ожога. Величина уровня патологических митозов оставалась на всем протяжении исследования стабильной (табл. 9).

Гистологические исследования роговицы глаза в различные периоды развития ожога глаз подтвердили выраженность деструктивных процессов и медленные процессы их обратного развития.

Исследование динамики ожогового процесса при ежедневных инстилляциях препарата Окомистин® проводили на 20 животных (40 глаз) с ожогом глаз тяжелой степени. Животные были разделены на 2 группы по 10 в каждой.

Для максимального приближения к применяемой в клинике глазных болезней схеме введения препарата выбраны 3 и 6 кратные инстилляции. Инстилляции осуществлялись в течение 4-х недель после нанесения химического ожога. Наблюдение за динамикой основных симптомов ожогового процесса проводили в течение 3-х мес. Анализ эффективности проводимой терапии осуществляли на основании сравнения с соответствующими показателями в контрольной группе животных (обработка дистиллированной водой). Анализ полученных данных показывает, что в опытных группах отмечено раннее и более быстрое течение процесса эпителизации пораженной роговицы в сравнении с контрольной группой (соответственно 10,11,9 и 16,12,1 сутки ). Рецидивы эрозий отмечались в 16,2% (в контрольной группе 100%). Значительно различалась средняя площадь первичных эрозий роговицы (4,00,7 - Окомистин® и 25,6 - контроль ).

Вторичные дефекты роговицы эпителизировались в опытной группе к 20-21 суткам, а в контрольной - после 32 суток наблюдений.

Более раннее начало неоваскуляризации в опытной группе характеризовалось быстрым развитием и меньшей длительностью. Купирование сосудистой реакции в опытной группе животных зарегистрировано на 22,01,5 сутки, тогда как в контрольной группе на 52,42,3 сутки .

Уменьшение воспалительной реакции переднего отрезка глазного яблока в опытной группе отмечено на 4-5 сутки после ожога, а в контрольной на 13-14 сутки, а длительность воспалительной реакции составила соответственно 12,01,5 и 50,02,2 сутки .

Осложнения ожогового процесса в опытной группе отсутствовали, тогда, как в контрольной группе на 3-х глазах отмечены инфильтрация роговицы с экссудацией в передней камере.

Исследование митотической активности эпителия у животных в процессе лечения препаратом Окомистин® выявили на всех этапах достоверно более высокие величины митотического индекса.

Патологических митозов не было зарегистрировано, что свидетельствует об отсутствии цитотоксического эффекта при использовании разработанной схемы инстилляции препарата Окомистин®.

Следует отметить, что к концу эксперимента при применении препарата Окомистин® грубые васкуляризованные бельма роговицы интенсивностью 8-9 баллов наблюдались на двух глазах, в то время как в контрольной группе в 100% случаев. К 32 дню наблюдений при инстилляциях Окомистина помутнения роговицы уменьшались и затем исчезали.

В соответствии с инструктивными требованиями для оценки “конъюнктивальной пробы” проводился контроль состояния конъюнктивы век и глазного яблока всех опытных животных, непосредственно после закапывания Окомистина. Ни в одном случае после инстилляций препарата не было отмечено, каких либо изменений или реакций со стороны конъюнктивы.

Положительное влияние препарата Окомистин® на течение ожогового процесса было отмечено при гистологических и электронно-микроскопических исследованиях участков роговицы глаз.

Анализ кратности инстилляций Окомистина показал, что 6-ти разовые инстилляции препарата экспериментальным животным с химическими ожогами глаз были несколько эффективнее 3-х разовых, однако не все изученные параметры патологического процесса имели статистически достоверные различия (начало и окончание первичной эпителизации, начало васкуляризации и др.).

В группе животных (10 кроликов) с химическими ожогами роговицы глаза, леченных 0,02% раствором декаметоксиновых глазных капель (ДГК), динамика ведущих симптомов ожоговой болезни отличалась от таковых в группе с препаратом Окомистин®. Так, отмечалось более позднее развитие процессов начала и завершения первичной эпителизации роговицы (соответственно 7,11,4 и 13,62,2 суток.), начало купирования воспалительной реакции переднего отрезка глазного яблока (12,81,8 суток.), позднее на 2 - 4 дня были сроки уменьшения отека век, блефароспазма, гиперемии конъюнктивы, перифокального отека роговицы. В группе с ДГК в два раза чаще, по сравнению с группой препарата Окомистин®, наблюдались осложнения ожогового процесса в виде рецидивов эрозий, инфильтрации роговицы и экссудации в переднюю камеру глаза. Значительно хуже проходили процессы восстановления прозрачности роговицы.

 

Результаты

Изучение эффективности влияния Окомистина на течение моделированных тяжелых химических ожогов глаз у крыс, вызванных 10% раствором аммиака, и у кроликов, вызванных 10% раствором NaOH, показало, что использование препарата Окомистин® в адекватной схеме, дает выраженный положительный терапевтический эффект. Данный эффект проявляется в уменьшении площади и количества рецидивов эрозий роговицы, снижении интенсивности и длительности воспалительной реакции переднего отрезка глазного яблока, способствует более прозрачному заживлению роговой оболочки.

О положительном влиянии Окомистина на процессы репаративной регенерации переднего эпителия роговицы говорит увеличение показателей митотической активности, а также данные гистологических и электронно-микроскопических исследований роговицы в динамике лечения ожога глаз.

 

ВЫВОДЫ

Результаты проведенных исследований позволяют рекомендовать 0 препарат Окомистин® в качестве средства для лечения термических и химических ожогов глаз, а также для профилактики и лечения воспалительных заболеваний глаз различной природы, возникающих, в том числе, после травм и оперативного вмешательства.

Препарат Окомистин® безвреден для организма, не обладают раздражающим действием на кожу и слизистые, аллергизирующими свойствами, эмбриотоксичностью, мутагенными и канцерогенными свойствами. Имеет выраженную противовоспалительную активность, усиливают регенераторные процессы, стимулируют рассасывание зон помутнения роговицы. Применение Окомистина при ожогах профилактирует прободение роговицы вследствие язвенно - некротических изменений, предупреждает развитие гнойных осложнений и образование бельма.

Экспериментальные исследования показали, что по своей активности при лечении термических и химических ожогов, а также воспалительных процессов глаз, препарат Окомистин® превосходит разрешенные для использования в медицинской практике декаметоксиновые глазные капли.

Все это позволяет рекомендовать проведение клинических испытаний 0,01% раствора мирамистина (глазные капли) при заболеваниях глаз.